【文献解读】隔药灸通过上调克罗恩病小鼠模型中A20的表达减轻异常肠上皮细胞凋亡

发布于 2021-09-15 13:28

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Zhou J, Wu L Y, Chen L, et al. Herbs-partitioned moxibustion alleviates aberrant intestinal epithelial cell apoptosis by upregulating A20 expression in a mouse model of Crohn's disease[J]. World J Gastroenterol, 2019,25(17):2071-2085.

Herbs-partitioned moxibustion alleviates aberrant intestinal epithelial cell apoptosis by upregulating A20 expression in a mouse model of Crohn’s disease
隔药灸通过上调克罗恩病小鼠模型中A20的表达减轻异常肠上皮细胞凋亡


摘要

隔药灸 (HPM) 已被证明是克罗恩病的有效治疗方法。然而,迄今为止,HPM 减少克罗恩病肠上皮细胞凋亡的机制尚未完全阐明。阐明 HPM 是否通过上调 A20 来影响克罗恩病小鼠模型中的肠上皮细胞凋亡来发挥其作用。我们的研究结果表明,HPM 治疗克罗恩病的作用可能是通过上调 A20 表达水平,导致 TNFR1、TRADD 和 RIP1 的下调,以减轻克罗恩病肠上皮屏障中增加的细胞凋亡。

结果

1.各组肠道形态观察

    在 A20 IEC-KO(敲除) NC 小鼠中,观察到完整的粘膜上皮细胞和正常的粘膜下层和肌层结构形态(图E)。在A20 IEC-KO MC小鼠中,除了粘膜表面的侵蚀和坏死外,在粘膜中观察到部分上皮细胞丢失、粘膜杯状细胞耗竭、炎性细胞浸润、腺体损伤和纤维组织增殖。在黏膜和黏膜下层均观察到充血和水肿(F)。在 A20 IEC-KO MESA 小鼠中,在粘膜中观察到稀疏的杯状细胞、小的愈合性溃疡伴腺体破坏和大量炎性细胞浸润。黏膜、黏膜下或肌层未见明显异常结构改变(G)。在 A20 IEC-KO HPM 小鼠中,黏膜组织中观察到稀疏的杯状细胞、炎性细胞浸润和纤维组织增殖。黏膜、黏膜下或肌层未见明显异常结构改变(H)。

2.各组上皮通透性的变化

    在 A20 IEC-KO组小鼠中,与 NC 小鼠相比,MC、MESA 和 HPM 组的血清内毒素水平上调(P MC < 0.01,P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)。与 MC 小鼠相比,它们在 MESA 和 HPM 小鼠中下调(P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)。与 MESA 组相比,HPM 小鼠的血清内毒素水平显著降低(P < 0.01)。与WT NC小鼠相比,NC A20 IEC-KO小鼠血清内毒素水平无显著差异(P > 0.05)。与WT MC小鼠相比,MC A20 IEC-KO小鼠的内毒素水平上调(P <0.05)。与WT HPM小鼠相比,HPM A20 IEC-KO小鼠的血清内毒素水平上调(P < 0.01)。


3. 各组凋亡小肠上皮细胞百分比观察

    在 A20 IEC-KO组中,与 NC 小鼠相比,MC、MESA 和 HPM 组的细胞凋亡百分比显著增加(P MC < 0.01,P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)。与 MC 组相比,MESA 和 HPM 组的细胞凋亡百分比显著降低(P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)。HPM 组和 MESA 组之间无差异(P > 0.05)(图E)。与相应的WT小鼠各组相比,A20 IEC-KO小鼠的NC、MC、MESA和HPM组的凋亡百分比显著增加(P NC < 0.01,P MC < 0.01,P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)(图A)。

4.TNF-α/TNFR1-TRADD-FADD 凋亡通路成员在各组肠上皮中的表达

    各组A20表达:A20 IEC-KO组间 A20 表达无显著差异(P NC > 0.05,P MC > 0.05,P MESA > 0.05,P HPM > 0.05)(图(图4A)。4A)。与相应的WT小鼠各组相比,所有A20 IEC-KO组的A20表达水平均显著降低(P NC < 0.01,P MC < 0.01,P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)(图A)。

    各组 TNF-α 表达:在 A20 IEC-KO组中,与 NC 小鼠相比,MC、MESA 和 HPM 组的 TNF-α 水平显著增加(P MC < 0.01,P MESA < 0.01,P HMP < 0.01)。与 MC 小鼠相比,MESA 和 HPM 小鼠的 TNF-α 水平显著降低(P MESA < 0.01,P HMP < 0.01)。与 MESA 组相比,HPM 小鼠的 TNF-α 水平降低(P < 0.05)(图(图4B)。4B)。A20 IEC-KO NC组和HPM组与相应的WT小鼠各组比较,TNF-α水平无差异(P > 0.05);TNF-α 在 MC 小鼠中表达增加(P < 0.05),在 MESA 小鼠中显著增加(P < 0.01)(图B)。

    各组TNFR1表达:在 A20 IEC-KO组中,与 NC 小鼠相比,MC 和 HPM 小鼠的 TNFR1 表达显著增加(P MC < 0.01,P HPM < 0.01)。它也在 MESA 小鼠中增加(P MESA < 0.05)。与MC小鼠相比,MESA和HPM组小鼠TNFR1表达显著降低(P MESA < 0.01,P HMP < 0.01)。与MESA组相比,HPM组小鼠TNFR1表达无差异(P > 0.05)(图(图4C)。4C)。与相应的WT MC和WT HPM组相比,A20 IEC-KO小鼠的TNFR1表达增加(P MC < 0.05,P HPM < 0.05)。在相应的 WT 和 A20 IEC-KO NC 和 MESA 组中,TNFR1 表达没有差异(P NC > 0.05,P MESA > 0.05)(图C)。

    各组TRADD表达:在 A20 IEC-KO组中,与 NC 小鼠相比,MC、MESA 和 HPM 小鼠的 TRADD 水平显著增加(P MC < 0.01,P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)。注意到 MC、MESA 和 HPM 组之间的 TRADD 水平没有差异(P > 0.05)(图(图4D)。4D)。与WT NC小鼠相比,同一组A20 IEC-KO小鼠的TRADD表达无差异(P > 0.05)。与相应的WT组相比,发现TRADD表达在MESA和HPM组小鼠中显著增加(P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)并且在MC组A20 IEC-KO小鼠中增加(P < 0.05)(图D)。

    RIP1 跨组表达:在A20 IEC-KO组小鼠中,与NC组相比,MC、MESA和HPM小鼠的RIP1水平显著升高(P MC < 0.01,P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)。MC、MESA 和 HPM 组之间的 RIP1 水平没有差异(P > 0.05)(图(图4E)。4E)。与WT NC小鼠相比,A20 IEC-KO NC小鼠的RIP1表达没有差异(P > 0.05)。与 WT HPM 小鼠相比,A20 IEC-KO HPM 小鼠中 RIP1 的表达增加(P < 0.01)。与相应的 WT MC 和 MESA 小鼠相比,A20 IEC-KO小鼠的RIP1 表达增加(P MC < 0.05,P MESA < 0.05)(图(图4E4E)。

    组间FADD表达:在 A20 IEC-KO组中,与 NC 小鼠相比,MC、MESA 和 HPM 小鼠的 FADD 水平显著增加(P MC < 0.01,P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)。在 MC、MESA 和 HPM 小鼠中,FADD 的表达没有差异(P > 0.05)(图(图4F)。4楼)。与 WT NC 和 MC 小鼠相比,A20 IEC-KO NC 和 MC 小鼠之间没有发现 FADD 水平差异(P NC > 0.05,P MC > 0.05)。与 WT HPM 小鼠相比,A20 IEC-KO HPM 小鼠的FADD 水平显著增加(P < 0.01)。与 WT MESA 小鼠相比,A20 IEC-KO MESA 小鼠的FADD 水平增加(P < 0.05)(图F)。

5.A20/TRADD和A20/RIP1在各组肠上皮组织中的共表达

    A20/TRADD 的共表达:细胞核染成蓝色。富含 A20 表达的区域染成绿色,而富含 TRADD 的区域染成红色。A20 和 TRADD 的共表达染成黄色(红色和绿色荧光)。在 A20 IEC-KO小鼠中,A20 水平在各组之间没有差异(P > 0.05)(图(图5I)。5I)。与相应的WT小鼠各组相比,A20 IEC-KO小鼠中A20的表达显著降低(P < 0.01)(图I)。在 A20 IEC-KO组中,与 NC 小鼠相比,MC、MESA 和 HPM 小鼠的 TRADD 水平显著增加(P MC < 0.01,P MESA < 0.01,P HPM < 0.01)。MC、MESA 和 HPM 小鼠的 TRADD 水平没有差异(P > 0.05)(图I)。5I)。与 WT MC 小鼠相比,A20 IEC-KO MC 小鼠的TRADD 水平增加(P < 0.05)。与WT HPM和MESA小鼠相比,相应A20 IEC-KO组小鼠TRADD水平显著升高(P HPM < 0.01,P MESA < 0.01)(图I)。

A20/RIP1 的共表达:A-H 显示细胞核显示蓝色荧光,而富含 A20 RIP1 的区域分别染绿色和红色。共表达 A20 RIP1 的区域主要染成黄色。在 A20 IEC-KO NC 小鼠中,稀疏的红色和绿色荧光很明显(图E)。在 A20 IEC-KO MCMESA HPM 组小鼠中,红色荧光占主导地位(图FH)。在A20 IEC-KO组中,各组之间A20水平无差异(P > 0.05)。与相应的WT小鼠各组相比,A20 IEC-KOA20水平显著降低NCMESA HPM 小鼠(NC < 0.01MESA < 0.01HPM < 0.01)并在 MC 小鼠中减少(MC < 0.05)(图I)。在 A20 IEC-KO组中,与 NC 小鼠相比,MCMESA HPM 小鼠的 RIP1 水平显著增加(MC < 0.01MESA < 0.01HPM < 0.01)。MCMESA HPM 小鼠的 RIP1 水平没有差异(P > 0.05)(图I)。与WT NC小鼠相比,A20 IEC-KO NC小鼠的RIP1水平没有差异(P > 0.05)。与 WT MC 小鼠相比,A20 IEC-KO MC 小鼠的RIP1 表达增加(P < 0.05)。与WT MESA小鼠相比,相应A20 IEC-KO组小鼠的RIP1表达显著增加(MESA < 0.01)。与 WT HPM 小鼠相比,A20 IEC-KO HPM 小鼠的RIP1 水平增加(HPM < 0.05)(图I)。

结论

   HPM 可以上调 A20 水平,导致 TNFR1、TRADD 和 RIP1 的表达降低,从而减轻克罗恩病肠上皮屏障中的异常细胞凋亡。

编辑:张靖宇  李柠岑

审核:陈波

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